麻痹性贝类毒素酶联试剂盒试剂盒基于竞争性ELISA酶联免疫的方法,麻痹性贝类毒素的抗体包被于酶标孔内,样品与麻痹性贝类毒素-酶标记物加入到微孔内,若样品中有麻痹性贝类毒素残留,它将与贝类毒素-酶标记物共同竞争酶标板包被的抗体。加入TMB底物后,颜色发生变化,经酶标仪检测读数后确定样品中贝类毒素的含量。颜色的深浅与毒素的残留量成反比
警告
实验前请阅读以下文字,以保证获得实验效果。
ü 标准品中含有腹泻性贝类毒素,请小心使用。
ü 不要使用过期的试剂盒。
ü 不同批次的试剂盒不要混用,抗体和微孔板具有盒与批次的特异性。
ü 尽量保持室温(25±2.5)℃,避免在通风口操作防止温度过低,过热和/或者蒸发。同样的,不要在阳光直射下实验,防止过热及蒸发。在孵育期间,如果工作台温度过低,应该铺垫若干纸巾或者其他物料。
ü 加入样品或者试剂到空的微孔板时,吸嘴靠于微孔接近底部,并保持接触。
ü 孵育时间的计算越规范越好,保持添加标准品的一致性,先添加标准品后添加样品。
ü 从低浓度到高浓度地添加标准品,降低影响标准品曲线质量的风险。
ü 将微孔板置于放有干燥剂的密封袋中,冷藏保存。
酶联免疫反应测试步骤
以下为计算份量的表格,用户可根据自己的需要来确定需要配置多少试剂。
组分 | 每孔所需量 | 24个反应所需量 |
贝类毒素酶标物 | 50uL | 1.2mL |
工作洗液 | 2.0ml | 48ml |
终止液 | 50mL | 1.2ml |
TMB底物 | 100mL | 2.4ml |
1) 加入50mL标准品或样品在所设定的孔中;
2) 每孔加入50mL 贝类毒素酶标物后,轻轻混匀20秒;
3) 室温(25±2.5)℃下避光孵育40分钟;
4) 每次加入1×洗液250mL,洗板3次,最后一次洗板后,倒置酶标板于干燥纸巾上清除多余水分;
5) 加入100mL TMB底物,轻轻晃动20秒以便摇匀,避光条件下室温(25±2.5)℃孵育12分钟;
6) 加入50mL终止液终止反应;
7) 酶标仪450nm读数。
4.结果计算
(1) 用平均相对吸光值建立标准曲线(以相对吸光值为纵坐标,浓度为横坐标)
相对吸光度值 (%) = (标准或样品吸光度值/零标准吸光度值) ´ 100
(2) 0标准品点OD在1.2-1.5之间,IC 50 在0.6-1.5ng/ml 采用四参数拟合曲线进行含量的统计
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