黄曲霉毒素总量免疫亲和柱是怎么操作的？操作时又要注意什么？

发布时间： 2022-09-08　　点击次数： 2549次

　　黄曲霉毒素总量免疫亲和柱测定的基础是抗原、抗体反应，抗体连接在柱体内，样品中的黄曲霉毒素经过提取、过滤、稀释，然后缓慢的通过黄曲霉免疫亲和柱，在免疫亲和柱内毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。用甲醇洗脱黄曲霉毒素，然后注入到分析仪器中用于检测。

　　原理：

　　样品经提取液提取、过滤、稀释，然后通过键合有黄曲霉毒素总量免疫亲和柱。此时，黄曲霉毒素被亲和柱中的抗体特异性的吸附，用水或缓冲液将免疫亲和柱上的杂质除去，然后用甲醇使抗体变性，从而将黄曲霉毒素从亲和柱上洗脱下来。最后，用HPLC或荧光计进行定量检测。

　　黄曲霉毒素总量免疫亲和柱的操作步骤简介：

　　1、提取样品：研磨、称重50g样品；用甲醇/水（80/20 V/V）混合物将样品高速混匀1分钟。

　　2、过滤：将提取的样品滤膜过滤，然后再过0.4μm滤膜。

　　3、吸附、淋洗：将滤液2ml加到8ml PBS缓冲液（pH7.2）后，通过AflaCLEAN净化柱，流速不大于1mL/min；用10ml水清洗亲合柱；用甲醇1ml 两次将黄曲霉毒素从亲合柱上淋洗下来，并收集于HPLC进样小瓶中。

　　4、测定：HPLC直接进样，在经过柱分离后，被UVE衍生化，被荧光检测器记录各种黄曲霉毒素的浓度。

　　注意事项：

　　1、黄曲霉毒素对人体有害，应戴手套操作；

　　2、使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素溶液用5%浓度的NaClO溶液浸泡过夜；

　　3、不要使用过了有效日期的免疫亲和柱；

　　4、免疫亲和柱不使用时要2-8℃保存，不可冻存；

　　5、使用前，免疫亲和柱需回至室温（22-25℃）；

　　6、取样量：根据实际情况可以适当增减，但不可太少，同时提取液体积要按比例随之改变；

　　7、pH：上柱液pH要在6~8之间，若偏离此范围需要HCl或NaOH调节pH。