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黄曲霉毒素总量免疫亲和柱是怎么操作的?操作时又要注意什么?

发布时间: 2022-09-08  点击次数: 16次
  黄曲霉毒素总量免疫亲和柱测定的基础是抗原、抗体反应,抗体连接在柱体内,样品中的黄曲霉毒素经过提取、过滤、稀释,然后缓慢的通过黄曲霉免疫亲和柱,在免疫亲和柱内毒素与抗体结合,之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。用甲醇洗脱黄曲霉毒素,然后注入到分析仪器中用于检测。
 

 

  原理:
  样品经提取液提取、过滤、稀释,然后通过键合有黄曲霉毒素总量免疫亲和柱。此时,黄曲霉毒素被亲和柱中的抗体特异性的吸附,用水或缓冲液将免疫亲和柱上的杂质除去,然后用甲醇使抗体变性,从而将黄曲霉毒素从亲和柱上洗脱下来。最后,用HPLC或荧光计进行定量检测。
 
  黄曲霉毒素总量免疫亲和柱的操作步骤简介:
  1、 提取样品:研磨、称重50g样品;用甲醇/水(80/20 V/V)混合物将样品高速混匀1分钟。
  2、 过滤:将提取的样品滤膜过滤,然后再过0.4μm滤膜。
  3、 吸附、淋洗:将滤液2ml加到8ml PBS缓冲液(pH7.2)后,通过AflaCLEAN净化柱,流速不大于1mL/min;用10ml水清洗亲合柱;用甲醇1ml 两次将黄曲霉毒素从亲合柱上淋洗下来,并收集于HPLC进样小瓶中。
  4、 测定:HPLC直接进样,在经过柱分离后,被UVE衍生化,被荧光检测器记录各种黄曲霉毒素的浓度。
 
  注意事项:
  1、黄曲霉毒素对人体有害,应戴手套操作;
  2、使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素溶液用5%浓度的NaClO溶液浸泡过夜;
  3、不要使用过了有效日期的免疫亲和柱;
  4、免疫亲和柱不使用时要2-8℃保存,不可冻存;
  5、使用前,免疫亲和柱需回至室温(22-25℃);
  6、取样量:根据实际情况可以适当增减,但不可太少,同时提取液体积要按比例随之改变;
  7、pH:上柱液pH要在6~8之间,若偏离此范围需要HCl或NaOH调节pH。
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