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腹泻性贝类毒素试剂盒不同分类及相关原理分析

发布时间: 2021-05-20  点击次数: 138次
  腹泻性贝类毒素试剂盒的原理是酶联免疫吸附测定法,用于水及水产品中腹泻性贝类毒素的定量测定。冈田酸是腹泻性贝类毒素的一种。对于水产品需要做前处理,不可以直接检测。如果需要的话阳性样品可以通过HPLC和GC/MS来验证。
 
  试剂盒中的标准溶液里含有少量的冈田酸。底物中包含有四甲基联苯胺,终止液中含有稀硫酸。要避免皮肤和粘膜与终止液接触,如果不小心接触了请马上用水冲洗。试剂盒应保存在2-8℃,不要冷冻。在使用之前要把试剂盒中的溶液回复到室温(20-25℃)。有效期内试剂盒中的试剂都可以使用。
 
  腹泻性贝类毒素试剂盒实验原理:
 
  本试剂盒采用直接竞争ELISA方法,在酶标板微孔上预包被二抗,将与软海绵酸酶标结合物竞争溶液中专属抗体提供的吸附位点。然后,软海绵酸-抗体将与固载于微孔板的第二抗体(山羊抗兔抗体)结合。冲洗掉微孔板上未结合的物质。经TMB 底物显色,样本吸光度值与其残留物呈负相关,与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数,即可得出样本中软海绵酸的含量。
 
  腹泻性贝类毒素试剂盒的分类:
 
  1、间接法测抗体
 
  间接法是检测抗体常用的方法。其原理为利用酶标记的抗抗体(抗人免疫球蛋白抗体)以检测与固相抗原结合的受检抗体,故称为间接法。
 
  2、双抗原夹心法测抗体
 
  反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物,以检测相应的抗体。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。此法中受检标本不需稀释,可直接用于测定,因此其敏感度相对高于间接法。乙肝标志物中抗HBs的检测常采用本法。本法关键在于酶标抗原的制备,应根据抗原结构的不同,寻找合适的标记方法。
 
  3、双抗体夹心法测抗原
 
  双抗体夹心法是检测抗原常用的方法,操作步骤如下:
 
  1)将特异性抗体与固相载体联结,形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。
 
  2)加受检标本,保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合,形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。
 
  3)加酶标抗体,保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。
 
  4)加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色,测知标本中抗原的量。
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