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百奥思科黄曲霉毒素B1免疫亲和柱操作说明书
【概要】
黄曲霉毒素(AFT)是一类化学结构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生物。黄曲霉毒素是主要由黄曲霉 (aspergillus flavus)寄生曲霉 (a.parasiticus)产生的次生代谢产物，在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。黄曲霉毒素被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构划定为1类致癌物，是一种毒性*的剧毒物质.黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时可导致肝癌甚至死亡。在天然污染的食品中以黄曲霉毒素B1最为多见，其毒性和致癌性也*。B1是最危险的致癌物，经常在玉米，花生，棉花种子，一些干果中常能检测到。它们在紫外线照射下能产生荧光，根据荧光颜色不同，将其分为B族和G族两大类及其衍生物。AFT已发现20余种。AFT主要污染粮油食品、动植物食品等；如花生、玉米，大米、小麦、豆类、坚果类、肉类、乳及乳制品、水产品等均有黄曲霉毒素污染。世界各国对食品，饲料中的黄曲霉毒素都有严格的*。
【适用范围及性能】
本公司真菌毒素免疫柱系列产品测试形式是一个高性能的免疫亲和柱，设计用于在进行 HPLC(高效液相色谱法)、GC-MS(气相色谱-质谱联 用 仪)、ELISA(酶联免疫吸附剂测定)之前清理(净化)或 浓缩样本。
用于定性、定量检测谷物、副食品、酒类等食品和饲料等样本中的黄曲霉毒素B1时的样品前处理。
柱容量：≥200ng
回收率：≥90%
3mL柱管/支
【试验原理】
本产品的测定的基础是抗原抗体反应，黄曲霉毒素B1单克隆抗体连接在柱内凝胶上，样品中的黄曲霉毒素B1经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢的通过黄曲霉毒素B1免疫亲和层析柱，在免疫亲和柱内，毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他物质。用甲醇洗脱黄曲霉毒素B1，最后进行相关分析。
【包装组成】
黄曲霉毒素B1标准品(选配)
25支/盒，3mL柱管/支
产品说明书1份
【需要而未提供的设备及试剂】
设备：
----高速均质器或组织匀浆机
----粉碎机
----200ml/50ml量筒
----天平：感量0.1g
----微量移液器：单道 100ml～1000ml
----槽纹滤纸(折叠快速定性或定量滤纸)
----玻璃微纤维滤纸(1.5mm孔径)
----50ml漏斗
----一次性玻璃试管
----泵流操作架(包括空气泵，不同容积的玻璃注射器等)
试剂：
----甲醇(色谱级)
----蒸馏水或去离子水
----pH7.0磷酸盐缓冲溶液(PBS)：称取8.0g氯化钠，1.2g磷酸氢二钠，0.2g磷酸二氢钾，0.2g氯化钾，用990mL纯水溶解，然后用浓盐酸调节pH值至7.0，最后用纯水稀释至1000mL
----吐温-20/PBS溶液(0.1%)：取1mL吐温-20，加入PBS缓冲溶液并定容至1000mL
【试剂配制】
样品提取液：根据不同的样品配置不同浓度的甲醇水溶液，作为样品提取液。
【样本处理步骤】
(一)花生，玉米，大米，小麦及其制品，植物油脂和饲料
----取25g粉碎的样品(植物油脂直接取样，无需处理)与125mL甲醇-水(7：3)溶液混合；
----加入5.0g氯化钠以均质器高速搅拌，提取2分钟；
----4000r/min离心5min或用槽纹滤纸过滤；
----取15mL滤液并加入30mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，取稀释后液体待测；
----将免疫亲和柱连接于20.0mL玻璃注射器下。准确移取15.0mL样品提取液注入玻璃注射器；
----将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约6mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2~3mL空气通过柱体；
----以10.0mL水淋洗柱子2次，弃去全部流出液，并使2mL~3mL空气通过柱体；
----准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱，流速为1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。
(二)酱油
----取50g试样与100mL甲醇-水(8：2)溶液混合；
----加入2.5g氯化钠以均质器高速搅拌，提取1分钟；
----4000r/min离心5min或用槽纹滤纸过滤；
----取10mL滤液并加入40mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤
----取稀释后液体待测；
----将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。准确移取10.0mL样品提取液注入玻璃注射器；
----将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约6mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2~3mL空气通过柱体；
----用10.0mL 0.1%的吐温/PBS清洗，再以10.0mL水淋洗柱子2次，弃去全部流出液，并使2mL~3mL空气通过柱体；
----准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱，流速为1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。
(三)食醋
----取5g试样，加入1.0g氯化钠；
----以pH7.0磷酸盐缓冲溶液稀释定容至25.0mL；
----4000r/min离心5min或用槽纹滤纸过滤；
----取10mL滤液并加入10mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤
----取稀释后液体待测。
----将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。准确移取10.0mL样品提取液注入玻璃注射器；
----将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约6mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2~3mL空气通过柱体；
----用10.0mL 0.1%的吐温/PBS清洗，再以10.0mL水淋洗柱子2次，弃去全部流出液，并使2mL~3mL空气通过柱体；
----准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱，流速为1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。
【结果判定】
经免疫亲和柱净化后，收集到的甲醇洗脱液可直接使用荧光计或者HPLC检测，也可使用薄层色谱或者酶联免疫试剂盒进行检测。收集到的1mL洗脱液中的黄曲霉毒素B1含量相当于1g样品中黄曲霉毒素B1含量。
【注意事项】
----黄曲霉毒素危害极大，应戴手套操作。
----使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素溶液最好用5%浓度次氯酸钠溶液浸泡过夜。
----不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。
【贮藏条件及保存期】
贮藏条件：亲和柱2-8℃常温保存，不可冻存
保存期：该产品有效期为12个月。
【参考标准】
GB/T 18979-2003
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